一、课程基本属性
实验课程编码：
1103420
实验课程中文名称：
分子生物学实验
实验课程英文名称：
Molecular Biology Experiments
实验课程类别：
基础核心课程
实验课程性质：
核心课程
总学时/学分：
32学时/2学分
实验学时/学分：
开课单位：
生命科学学院
开设学期：
第4学期
适用专业及类型：
先修课程：
分子生物学
主撰人：
主审人：
制定时间：
2017年6月20日
二、课程简介与教学目标
（一）课程简介
《分子生物学实验》是实践性很强的一门实验课程，通过该课程的学习，让学生系统地学习、完成基因组DNA 提取、基因克隆、DNA重组及筛选鉴定等相关的实验操作，掌握一些基本的分子生物学技术，熟悉常用仪器设备的使用。该课程是《分子生物学》教学重要的组成部分，采用传统的实验教学方法，结合多媒体、网络资源、讲座与讨论、视频录像等多种手段，通过讲解实验目的、原理、方法、教师演示、学生操作、课堂总结及实验报告培养学生在分子生物学领域基本技术和技能，培养其动手能力、科研能力和科学、严谨、实事求是的学风。
（二）教学目标
通过本课程的教学应实现以下目标：
——了解分子生物学常用的技术、方法、原理及在相关领域的应用。
——熟悉分子生物学实验相关仪器、设备的使用和操作。
——掌握和应用分子生物学实验基本技能，学会实验结果、数据的分析和处理。
三、实验项目与学时分配
表1 实验项目与学时分配表
序号
实验项目名称
学时分配
实验类别
实验类型
每组人数
要求
1
分子生物学基本操作规范及药品的配置和准备
2
专业教育
演示性
4
必做
植物基因组DNA的提取及其定性定量分析
8
验证性
3
PCR扩增目的片段、电泳检测和胶回收
6
综合性
大肠杆菌感受态细胞的制备
5
目的片段和载体的连接、转化及重组质粒的筛选
重组质粒的提取及酶切鉴定
合计
32
四、实验条件
表2 实验主要设备和台件数
实验项目
设备名称
每组应配台件数
备注
无
移液器、低温离心机、超微 b 量分光光度计、水浴锅、凝胶成像仪、微波炉、制冰机
1．移液器每组1套（2.5微升、10微升、50微升、200微升和1000微升各1把）。
2．其它仪器设备根据实际情况2-4组1台（件）。
PCR仪、电泳仪、凝胶成像仪、台式离心机、移液器、制冰机
摇床、超净台、移液器、制冰机
2．其它仪器设备根据实际情况2-8组1台（件）。
摇床、生化培养箱、超净台、制冰机、移液器
台式离心机、水浴锅、制冰机
五、实验内容及要求
表3 实验内容及要求
实验内容
基本要求
分子生物学实验的注意事项；认识分子生物学实验基本仪器、学习操作规范；微量移液器的使用。
（1）了解分子生物学实验常用的仪器设备。
（2）熟悉分子生物学实验注意事项。
（3）掌握微量移液器的使用。
CTAB法提取DNA的常规方法；琼脂糖凝胶电泳定性分析DNA；分光光度法定量分析所提取的DNA。
（1）了解提取基因组DNA的各种方法及原理，电泳的基本知识。（2）熟悉实验药品的配置、原理，离心机的使用，微量分光光度计的使用，琼脂糖凝胶的制备。（3）掌握CTAB法提取植物基因组DNA的方法，DNA定性定量的方法和原理，琼脂糖凝胶电泳技术。
以实验2提取的基因组DNA为模板，PCR扩增目的基因；琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物；胶回收PCR扩增产物。
（1）了解扩增基因的一般过程，胶回收的原理。
（2）熟悉PCR仪的使用和设置，引物的设计。
（3）掌握PCR扩增的基本原理和技术，胶回收的方法。
CaCl2制备大肠杆菌DH5α感受态细胞。
（1）了解感受态制备的各种方法及原理，感受态细胞的用途。
（2）熟悉CaCl2感受态制备的实验流程。
（3）掌握掌握CaCl2制备感受态细胞的技术。
将实验3获得的PCR产物通过T4连接酶连接到克隆载体；重组质粒转化大肠杆菌感受态细胞；蓝白斑筛选和菌落PCR鉴定。
（1）了解基因重组的原理、抗性标记筛选的原理。
（2）熟悉重组质粒鉴定的方法和流程。
（3）掌握连接、转化的实验方法，蓝白斑筛选重组质粒的原理和方法，菌落PCR鉴定重组质粒的方法。
将实验5筛选到的重组质粒单菌落进行培养；从培养的大肠杆菌中提取质粒；酶切；电泳进行鉴定。
（1）了解质粒提取的原理、酶切的原理。
（2）熟悉酶切位点的识别和应用。
（3）掌握碱裂解法小量提取纯化质粒的方法，酶切鉴定重组质粒的方法。
六、实验报告
实验报告内容包括：实验目的、实验原理、试验步骤、实验结果与分析、讨论与体会。实验报告要求写作规范。
七、考核办法和成绩评定
（一）考核方式：
考试、考察、实验报告
考核方式包括实验态度、卫生、安全，考试内容包括实验基本操作和原理，重点考察学生对分子生物学实验基本理论和实验技能的理解、掌握及其灵活应用的能力。
（二）成绩评定：
实验总评成绩＝实验态度、卫生、安全（10％）+实验操作（25％）+实验报告（35％）+实验考试（30％）。
八、推荐教材、参考书及网络资源
（一）教材与参考书
1．《分子生物学实验指导》，高等教育出版社，魏群，2015。
2．《分子生物学实验技术指导》，内蒙古农业大学出版社，刘惠荣，2008。
3．《精编分子生物学实验指南》，科学出版社，奥斯伯，2008。
4．《分子克隆实验指南》第三版，科学出版社，萨母布鲁克著，黄培堂等译，2005。
5．《分子生物学实验技术》，北京大学出版社，郝福英，1998。
（二）相关网络资源
1．爱课程，中国大学MOOC（http://www.icourses.cn/imooc/）。
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